Plasmide CRISPR/Cas9 KO Endothelial Lipase (h): sc-406307

Présentation

LIPG code la lipase endothéliale (EL), une phospholipase A1 sécrétée exprimée par l’endothélium vasculaire, qui hydrolyse les phospholipides des HDL circulantes et module le remodelage des lipoprotéines ainsi que le transport du cholestérol. En régulant le catabolisme des HDL et le renouvellement des phospholipides, EL influence l’homéostasie lipidique vasculaire et interfère avec la signalisation inflammatoire dans les cellules endothéliales et les macrophages. Des altérations de l’activité et de l’expression de LIPG ont été associées à des phénotypes liés à la dyslipidémie et à des processus pertinents pour l’athérosclérose, notamment la dysfonction endothéliale et l’inflammation vasculaire induite par les lipides. LIPG est également étudié pour son impact sur les réseaux extracellulaires de lipases avec la LPL et la lipase hépatique, ainsi que pour ses effets sur la production de médiateurs lipidiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Endothelial Lipase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LIPG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LIPG, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LIPG à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Endothelial Lipase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LIPG pour l'étude de la signalisation de Endothelial Lipase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LIPG essentiels à la fonction de Endothelial Lipase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LIPG pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Endothelial Lipase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Endothelial Lipase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LIPG. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Endothelial Lipase plasmide HDR (h) et le Endothelial Lipase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LIPG pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LIPG définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.