Embigin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408321-ACT

O EMB humano codifica a embigina, uma glicoproteína transmembranar do tipo I da superfamília das imunoglobulinas que atua como subunidade acessória de transportadores de monocarboxilatos e modula interações célula–célula e célula–matriz. Ao sustentar o fluxo de lactato e piruvato por meio de complexos MCT, a embigina contribui para a homeostase metabólica, a regulação do pH e a adaptação ao microambiente em tecidos em proliferação. A biologia ligada ao EMB cruza-se com vias que governam adesão, migração e utilização de nutrientes, processos frequentemente reprogramados na oncogênese e em estados inflamatórios. A expressão desregulada de embigina foi relatada em múltiplos contextos associados a doenças, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos de remodelação metabólica e invasividade celular.

Embigin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EMB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Embigin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EMB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EMB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Embigin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EMB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Embigin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Embigin em células tumorais com expressão de EMB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.