Elongin A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404668

Übersicht

ELOA kodiert Elongin A, eine zentrale Komponente des Elongin-Transkriptionselongationskomplexes, der die Prozessivität der RNA-Polymerase II erhöht und zur Koordination einer produktiven mRNA-Synthese beiträgt. Elongin A ist zudem an transkriptionsgekoppelten Ubiquitin-Ligase-Komplexen beteiligt und verknüpft damit die Kontrolle der Elongation mit Proteinumsatz und zellulären Stressantworten. Über diese Funktionen beeinflusst ELOA Genexpressionsprogramme, die Proliferation, DNA-Schadensantworten und die Anpassung an proteotoxische Bedingungen steuern. Eine Fehlregulation der Transkriptionselongation sowie der ubiquitinvermittelten Regulation ist ein wiederkehrendes Merkmal bei Krebs- und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen, was ELOA zu einem geeigneten Knotenpunkt für mechanistische Untersuchungen dieser Signalwege macht.

Das Elongin A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ELOA-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ELOA-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ELOA nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Elongin A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ELOA-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Elongin A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ELOA-Exone abzielen, die für die Elongin A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ELOA-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Elongin A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Elongin A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ELOA-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Elongin A HDR-Plasmid (h) und Elongin A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ELOA-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ELOA-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.