eIF4H CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-411056

概要

EIF4Hは、ヒトの翻訳開始因子eIF4Hをコードしています。eIF4Hは補助タンパク質としてeIF4Aと協調し、ATP依存的なRNAヘリカーゼ活性を増強するとともに、キャップ依存的な翻訳開始の過程で、構造を形成した5′UTRをリボソームがスキャンして進むのを促進します。リボソームのリクルートやmRNAごとの翻訳効率を調節することで、eIF4Hは増殖シグナルや細胞ストレスに応じたプロテオーム産生のあり方を形作り、EIF4Hの機能は増殖・分化・ストレス適応プログラムの制御と結び付けられています。eIF4Hを含む翻訳開始因子群の制御異常は、がん化や生存に関わる経路の発現変動と関連づけられており、腫瘍生物学、神経生物学、ウイルス—宿主間の翻訳制御などの文脈で頻繁に研究されています。そのため、EIF4Hの撹乱は、翻訳制御機構とその下流シグナル伝達上の帰結を解明するための有用な手がかりとなります。

eIF4H CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるEIF4H遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、EIF4H内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、EIF4Hのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、eIF4Hタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、eIF4Hシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、EIF4H欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• eIF4Hの機能に不可欠なEIF4Hエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、EIF4Hゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• eIF4H CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびeIF4H CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、EIF4H遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  eIF4H HDRプラスミド（h）および eIF4H HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEIF4Hホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEIF4H標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。