eIF4AII CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402758-ACT

EIF4A2は、eIF4F翻訳開始複合体の中核を担うDEAD-box型RNAヘリカーゼであるeIF4AIIをコードします。eIF4AIIは5′UTRに存在する二次構造を解きほぐし、mRNAのリボソームへのロードを協調的に進めることでキャップ依存的翻訳を支え、細胞の増殖やストレスのシグナルに応じてプロテオームの産生を調整します。その活性は、タンパク質合成、RNA代謝、ストレス適応的な翻訳リプログラミングを制御する経路と関連しており、これらはいずれも増殖やストレスに関わる疾患の生物学においてしばしば攪乱されるプロセスです。eIF4Aファミリーによる翻訳制御の変化は、mRNA翻訳の異常が腫瘍性シグナル伝達、神経生物学、ウイルス—宿主相互作用にどのように寄与するかを検討するために利用されてきましたが、臨床的な転帰を示唆するものではありません。

eIF4AII CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EIF4A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

eIF4AII CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EIF4A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEIF4A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性eIF4AIIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEIF4A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるeIF4AII依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEIF4A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるeIF4AII経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。