eIF4AI CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402623-ACT

EIF4A1は、ヒトのeIF4AI（DEADボックス型RNAヘリカーゼ）をコードしており、構造をもつ5′UTRをほどいて43Sプレイニシエーション複合体のスキャニングと開始コドン認識を促進する、翻訳開始因子複合体eIF4Fの中核構成要素です。キャップ依存的翻訳の効率を調節することで、eIF4AIはプロテオーム産生量、細胞周期の進行、ストレス適応プログラムに影響を与え、さらにmRNA翻訳を再編するmTORシグナルや統合ストレス応答（ISR）とも機能的に交差します。eIF4A依存的翻訳の制御異常は、複数の疾患状況でみられる増殖・生存経路の破綻と関連づけられており、そのためEIF4A1は翻訳制御機構を解析するための代表的な標的（ノード）として広く用いられています。

eIF4AI CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EIF4A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

eIF4AI CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EIF4A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEIF4A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性eIF4AIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEIF4A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるeIF4AI依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEIF4A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるeIF4AI経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。