eIF3η CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400817-ACT

EIF3Bは、真核翻訳開始因子3のサブユニットη（eIF3η）をコードしており、43Sプレイニシエーション複合体の組み立てを調整し、mRNAの40Sリボソームサブユニットへのリクルートを促進するeIF3複合体の中核構成要素である。翻訳開始の制御を通じて、EIF3Bは細胞増殖、ストレス応答、細胞周期進行に伴うプロテオームの再編成に影響し、全体的および転写産物選択的なタンパク質合成を形作るシグナル入力を統合する。eIF3サブユニットが関与する翻訳制御の破綻は、増殖プログラムの変化や細胞形質転換と関連づけられており、そのためEIF3Bは、リボソームへのロード、mRNA選択性、プロテオスタシスを研究するうえで有用な結節点となる。研究者は一般に、開始因子機能の変化を経路レベルでの遺伝子発現出力の変化と結び付けるためにEIF3Bを解析する。

eIF3η CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EIF3Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

eIF3η CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EIF3B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEIF3B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性eIF3ηの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEIF3B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるeIF3η依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEIF3B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるeIF3η経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。