EDEM3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408476-ACT

EDEM3（ER分解促進α-マンノシダーゼ様タンパク質3）は、小胞体（ER）に局在する糖タンパク質の品質管理機構の構成要素であり、脱マンノース化に依存した認識と処理を促進することで、ミスフォールドしたN結合型糖タンパク質の認識および除去を進め、小胞体関連分解（ERAD）に関与します。さらに、アンフォールドタンパク質応答（UPR）、プロテオスタシス、分泌経路の忠実性に影響を与えることで、EDEM3は細胞のストレス適応や異常なクライアントタンパク質のターンオーバー調節に寄与します。ERADおよびERプロテオスタシスの破綻は、慢性的なERストレス、糖鎖プロセシングの変化、タンパク質分解の制御異常が病態形成に関与する状況を含め、疾患生物学全般に広く関連します。そのためヒトEDEM3は、機構解析および機能ゲノミクスのワークフローにおいて、ER品質管理回路や分泌経路ホメオスタシスを研究するための有用なハブ（ノード）となります。

EDEM3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EDEM3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EDEM3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EDEM3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEDEM3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EDEM3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEDEM3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEDEM3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEDEM3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEDEM3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。