EDD CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402123-ACT

UBR5はヒトEDDタンパク質をコードしており、標的ユビキチン化を介してタンパク質の分解・代謝回転やシグナル伝達を制御するHECT型E3ユビキチンリガーゼである。EDDは、DNA損傷の検知と修復の協調、チェックポイント制御の調節、細胞ストレスに対する転写応答の形成を通じて、ゲノム安定性維持プログラムに関与する。これらの機能により、細胞周期進行、複製ストレス耐性、ならびにユビキチン–プロテアソーム系の動態と交差するプロテオスタシス経路に影響を及ぼす。UBR5/EDD活性の破綻やコピー数変化は、がん化シグナルネットワークの変容やDNA修復能の異常と関連づけられており、腫瘍生物学およびストレス適応的転写を研究する上での機序的ハブとしての有用性を支持している。

EDD CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UBR5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EDD CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UBR5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUBR5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EDDの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUBR5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEDD依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUBR5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEDD経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。