Edc4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403803-ACT

ヒトEDC4は、細胞質のプロセシングボディ（P-body）における保存性の高い足場タンパク質Edc4をコードしており、DCP1/DCP2や関連エキソヌクレアーゼなどの中核因子を組織化することで、mRNAのデキャッピングおよび5′→3′分解を協調的に制御します。転写後遺伝子制御におけるこの役割を通じて、Edc4はmRNAのターンオーバー、翻訳抑制、ならびにストレス応答性リボヌクレオタンパク質顆粒のダイナミクスに影響します。P-bodyおよびデキャッピング経路の撹乱は、増殖・分化・炎症性シグナル伝達を形作る転写産物の安定性プログラムを再編し得ます。RNA代謝やデキャッピング複合体活性の破綻は、がん化や神経生物学的表現型と関連づけられており、EDC4は疾患関連のRNA恒常性を研究するための結節点（ノード）として有用であることが示唆されます。

Edc4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EDC4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Edc4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EDC4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEDC4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Edc4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEDC4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEdc4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEDC4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEdc4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。