EBF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402438

Übersicht

EBF4 (early B-cell factor 4) ist ein Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor der EBF-Familie, der an DNA bindet, um Genexpressionsprogramme zu regulieren, die mit Zellschicksalsfestlegung und Gewebedifferenzierung verknüpft sind. Durch die Koordination transkriptioneller Netzwerke, die sich mit der Chromatinregulation und entwicklungsbiologischen Signalwegen überschneiden, kann EBF4 linienassoziierte Prozesse beeinflussen, etwa die neuronale und immunbezogene Genexpression. Eine veränderte Kontrolle der Transkriptionsschaltkreise der EBF-Familie wurde in Kontexten wie neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und krebsassoziierter transkriptioneller Reprogrammierung untersucht, wodurch EBF4 ein nützlicher Knotenpunkt für die Erforschung fehlregulierter Differenzierung ist. Die funktionelle Untersuchung von EBF4 ermöglicht mechanistische Analysen nachgeschalteter Zielgene, der Belegung von Promotoren/Enhancern sowie von pathwayweiten Effekten auf Proliferation und zelluläre Identität.

Das EBF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des EBF4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des EBF4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von EBF4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EBF4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von EBF4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EBF4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf EBF4-Exone abzielen, die für die EBF4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere EBF4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EBF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom EBF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des EBF4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EBF4 HDR-Plasmid (h) und EBF4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von EBF4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten EBF4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.