EBF4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402438-ACT

EBF4（early B-cell factor 4）は、DNAに結合して系譜（ラインエージュ）特異的な遺伝子発現プログラムを協調的に制御するEBFファミリーに属するヘリックス–ループ–ヘリックス型転写因子をコードします。他のEBFパラログほど詳細には解明されていないものの、EBF4はエンハンサーおよびプロモーターへの占有を介して、細胞分化、発生パターニング、細胞アイデンティティの維持に関わる転写ネットワークの制御に関与すると考えられています。クロマチンのアクセス可能状態や転写出力を形作ることにより、EBF4は増殖制御、代謝適応、ストレス応答性遺伝子発現などの過程に影響し得ます。EBFファミリーの転写回路の破綻は、異常な分化状態や疾患に関連した転写リプログラミングと関連づけられており、そのためEBF4は遺伝子制御ネットワークの作用機序を研究する上で有用な標的となります。

EBF4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EBF4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EBF4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EBF4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEBF4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EBF4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEBF4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEBF4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEBF4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEBF4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。