EBF1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401258-ACT

EBF1（early B-cell factor 1）は、B細胞へのコミットメント、分化、ならびに免疫系の恒常性維持に必要なクロマチンアクセシビリティと遺伝子発現プログラムを制御する、系譜決定型の転写因子です。造血細胞では、EBF1はPAX5やE2Aなどの因子と協調して、V(D)J再構成、B細胞受容体（BCR）シグナル伝達能、および生存を制御する転写ネットワークを統合的に調節します。リンパ球形成以外でも、EBF1は状況（コンテキスト）依存的な転写制御を介して、脂肪細胞分化や神経発生にも関与します。EBF1の発現や機能の異常は、B細胞発生の障害や、血液疾患の病態で観察される転写状態の変化と関連づけられています。

EBF1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EBF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EBF1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EBF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEBF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EBF1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEBF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEBF1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEBF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEBF1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。