EAP30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406312

Übersicht

SNF8 kodiert EAP30, eine zentrale Komponente des ESCRT-II-Komplexes, der die endosomale Sortierung ubiquitinierter Membranproteine in multivesikuläre Körper zur lysosomalen Degradation koordiniert. Durch ESCRT-abhängige Membranumbauprozesse unterstützt EAP30 die Herunterregulierung von Rezeptoren, den endolysosomalen Transport sowie die Kopplung von ESCRT-II an ESCRT-III während der Bildung intraluminaler Vesikel. Diese Prozesse beeinflussen die Abschwächung von Signalwegen, die Homöostase von Membranproteinen und Aspekte der Zytokinese sowie des viralen Buddings, die auf die ESCRT-Maschinerie angewiesen sind. Eine Fehlregulation des ESCRT-vermittelten Transports wurde mit veränderter Signalgebung von Wachstumsfaktorrezeptoren, Proteostase-Stress und genomischer Instabilität in Verbindung gebracht, wodurch SNF8/EAP30 für Studien zur Krebsbiologie und zu endolysosomalen Defekten im Zusammenhang mit Neurodegeneration relevant ist.

Das EAP30 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SNF8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SNF8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SNF8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EAP30-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SNF8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EAP30-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SNF8-Exone abzielen, die für die EAP30-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SNF8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EAP30 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom EAP30 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SNF8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EAP30 HDR-Plasmid (h) und EAP30 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SNF8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SNF8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.