EAAT4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422986
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- EAAT4 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im EAAT4-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: EAAT4: sc-293344
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EAAT4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422986 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Slc1a6 kodiert den exzitatorischen Aminosäuretransporter 4 (EAAT4), einen hochaffinen, Na+-abhängigen Glutamattransporter, der zur Entfernung von extrazellulärem Glutamat beiträgt und exzitotoxische Signalübertragung an Synapsen begrenzt. Im ZNS der Maus ist EAAT4 besonders in zerebellären Purkinje-Neuronen angereichert und formt die synaptische Transmission, indem er die Glutamataufnahme an Ionengradienten koppelt und dadurch neuronale Erregbarkeit und Plastizität beeinflusst. Durch die Regulation der glutamatergen Neurotransmission ist EAAT4 mit Signalwegen verknüpft, die mit synaptischer Homöostase, calciumabhängiger Signalübertragung und neuroinflammatorischen Reaktionen auf fehlreguliertes Glutamat zusammenhängen. Eine veränderte Glutamat-Transportkapazität ist relevant für Modelle zerebellärer Dysfunktion und für weiter gefasste, mit Neurodegeneration assoziierte Phänotypen, bei denen exzitatorische Signalübertragung und synaptische Integrität gestört sind.
Das EAAT4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Slc1a6-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Slc1a6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Slc1a6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EAAT4-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Slc1a6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EAAT4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Slc1a6-Exone abzielen, die für die EAAT4-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Slc1a6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom EAAT4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom EAAT4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Slc1a6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EAAT4 HDR-Plasmid (m) und EAAT4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Slc1a6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Slc1a6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.