EAAT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400917

概要

SLC1A3は興奮性アミノ酸トランスポーター1（EAAT1）をコードしており、EAAT1は高親和性のナトリウム依存性グルタミン酸／アスパラギン酸トランスポーターとして、アストロサイトに豊富に発現し、細胞外グルタミン酸の除去を担います。EAAT1はグルタミン酸の取り込みをイオン勾配に結び付けることで、シナプス伝達の維持に寄与し、ニューロン‐グリア間の代謝的カップリングを調節し、興奮毒性シグナルを抑制します。また、グルタチオン合成に必要なグルタミン酸の供給を通じてレドックスバランスの維持にも関与します。EAAT1の機能は、グルタミン酸作動性神経伝達、アストロサイトの恒常性維持プログラム、細胞外イオンの緩衝や神経伝達物質リサイクリングを制御する経路と統合的に連携しています。SLC1A3の機能や発現の変化は、発作性運動失調や興奮毒性損傷への感受性など、神経発達・神経変性に関連する表現型と結び付けられており、中枢神経回路の安定性やグリア生物学の研究において重要な標的となります。

EAAT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC1A3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC1A3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC1A3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EAAT1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EAAT1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC1A3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EAAT1の機能に不可欠なSLC1A3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC1A3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EAAT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびEAAT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC1A3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EAAT1 HDRプラスミド（h）および EAAT1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC1A3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC1A3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。