Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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E2F-8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406972
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- E2F-8 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico E2F-8, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: E2F-8 Anticuerpo (B-9): sc-514064
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
E2F-8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406972 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
E2F8 codifica E2F-8, un miembro atípico de la familia de factores de transcripción E2F que funciona principalmente como un represor transcripcional que controla la progresión del ciclo celular y el momento de la replicación del ADN. E2F-8 participa en redes reguladas por RB/E2F, coordina la expresión génica de la fase S y contribuye al mantenimiento de la estabilidad del genoma mediante la regulación de programas proliferativos. Desempeña funciones en el control del crecimiento durante el desarrollo y en decisiones de destino celular, y la alteración de la expresión de E2F8 se ha vinculado a la proliferación desregulada observada en múltiples contextos de cáncer. Dado que E2F-8 se integra con vías centrales asociadas a puntos de control y a la replicación, es un nodo útil para estudiar el control transcripcional de la entrada en el ciclo celular y las respuestas al estrés replicativo.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO E2F-8 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen E2F8 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del E2F8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de E2F8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína E2F-8.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en E2F8 para la investigación de la señalización de E2F-8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de E2F8 críticos para la función de E2F-8
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de E2F8 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido E2F-8 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido E2F-8 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus E2F8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR E2F-8 (h) y el plásmido HDR E2F-8 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología E2F8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana E2F8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.