E2F-8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406972

概要

E2F8は、E2F転写因子ファミリーに属する非典型的メンバーであるE2F-8をコードしており、主として転写抑制因子として機能し、細胞周期の進行やDNA複製タイミングの制御に関与します。E2F-8はRB/E2Fによって制御されるネットワークに参加し、S期遺伝子発現を協調的に調節するとともに、増殖プログラムの制御を通じてゲノム安定性の維持に寄与します。また、発生における成長制御や細胞運命決定にも役割を持ち、E2F8発現の変化は、複数のがんにおいて見られる増殖異常と関連づけられています。E2F-8は主要なチェックポイント経路および複製関連経路と接点を持つため、細胞周期への進入の転写制御や複製ストレス応答を研究する上で有用な結節点となります。

E2F-8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるE2F8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、E2F8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、E2F8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、E2F-8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、E2F-8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、E2F8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• E2F-8の機能に不可欠なE2F8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、E2F8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• E2F-8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびE2F-8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、E2F8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  E2F-8 HDRプラスミド（h）および E2F-8 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはE2F8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のE2F8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。