Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dynein HC (h): sc-400919

Présentation

DYNC1H1 code la chaîne lourde de la dynéine cytoplasmique 1, un moteur dépendant des microtubules qui convertit l’hydrolyse de l’ATP en un transport dirigé vers l’extrémité moins. La chaîne lourde de la dynéine (HC) est au cœur du trafic intracellulaire, du positionnement des organites, de la dynamique des endosomes et des lysosomes, du transport axonal, ainsi que de l’assemblage et de l’orientation du fuseau mitotique grâce à une activité coordonnée avec la dynactine et des protéines adaptatrices. En modulant le transport dépendant des microtubules et les processus de division cellulaire, DYNC1H1 influence le maintien neuronal, la polarité et les voies de protéostase. Des altérations génétiques ou un dysfonctionnement de la chaîne lourde de la dynéine ont été associés à des mécanismes de maladies neurodéveloppementales et neuromusculaires, ce qui en fait une cible majeure pour l’étude des défauts de transport et des réponses au stress du cytosquelette.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Dynein HC (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DYNC1H1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DYNC1H1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DYNC1H1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Dynein HC.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DYNC1H1 pour l'étude de la signalisation de Dynein HC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DYNC1H1 essentiels à la fonction de Dynein HC
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DYNC1H1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Dynein HC plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Dynein HC plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DYNC1H1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Dynein HC plasmide HDR (h) et le Dynein HC (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DYNC1H1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DYNC1H1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.