Dynein HC CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400919

概要

DYNC1H1は、ATP加水分解をマイナス端方向の輸送へと変換する微小管依存性モーターである細胞質ダイニン1のヘビーチェーンをコードしています。ダイニンHCは、ダイナクチンおよびアダプタータンパク質との協調的な作用を通じて、細胞内輸送、オルガネラの配置、エンドソーム／リソソーム動態、軸索輸送、さらに有糸分裂紡錘体の組み立てと配向の制御において中心的役割を担います。微小管依存的な輸送と細胞分裂のプロセスを形作ることで、DYNC1H1は神経細胞の維持、極性、ならびにプロテオスタシス（タンパク質恒常性）経路にも影響を及ぼします。ダイニンヘビーチェーンの遺伝学的攪乱や機能不全は、神経発達疾患や神経筋疾患の発症機序と関連づけられており、輸送障害や細胞骨格ストレス応答を研究するうえで重要な標的となっています。

Dynein HC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDYNC1H1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DYNC1H1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DYNC1H1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Dynein HCタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Dynein HCシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DYNC1H1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Dynein HCの機能に不可欠なDYNC1H1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DYNC1H1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Dynein HC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDynein HC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DYNC1H1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Dynein HC HDRプラスミド（h）および Dynein HC HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDYNC1H1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDYNC1H1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。