DYNC2H1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406180

Übersicht

DYNC2H1 kodiert die schwere Kette des zytoplasmatischen Dyneins 2, den wichtigsten retrograden Motor der intraflagellären Transport-(IFT)-Maschinerie, der den Transport von der Zilienspitze zur Basis antreibt. Durch die Kopplung der ATP-getriebenen Motilität an IFT-A- und Frachtadapter-Komplexe ist DYNC2H1 für den Aufbau und die Aufrechterhaltung primärer Zilien sowie für die zilienabhängige Signaltransduktion, einschließlich der Dynamik des Hedgehog-Signalwegs, essenziell. Eine Störung von DYNC2H1 beeinträchtigt die Zilienstruktur und verändert entwicklungsrelevante Signalausgaben, wodurch das Gen mit menschlichen Ziliopathien in Verbindung steht, die durch skelettale und entwicklungsbezogene Phänotypen gekennzeichnet sind. Diese Funktionen machen DYNC2H1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Zilienbiologie, des Organellentransports und signalwegregulierter Transkriptionsprogramme.

Das DYNC2H1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DYNC2H1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DYNC2H1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DYNC2H1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DYNC2H1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DYNC2H1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DYNC2H1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DYNC2H1-Exone abzielen, die für die DYNC2H1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DYNC2H1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DYNC2H1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DYNC2H1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DYNC2H1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DYNC2H1 HDR-Plasmid (h) und DYNC2H1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DYNC2H1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DYNC2H1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.