Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Double Nickaseプラスミド (m): sc-420081-NIC

マウスのDvl2は、細胞質の足場タンパク質であるDishevelled 2（DVL2）をコードし、Frizzled受容体で受け取ったWntリガンドのシグナルを下流エフェクターへと中継する。DVL2は、カノニカルなWnt/β-カテニン依存性の転写プログラムと、非カノニカルな平面内細胞極性（PCP）およびWnt/Ca²⁺経路を統合し、細胞極性、細胞骨格リモデリング、遊走、発生パターニングに影響を及ぼす。経路出力を調節することで、DVL2は文脈依存的に増殖と分化の制御に寄与するため、組織形態形成や幹細胞生物学の分野で広く研究されている。Wnt–Dishevelledシグナルの破綻は、先天性の発生異常や疾患に伴うシグナル伝達の再配線に関与するとされ、マウスモデルにおける経路制御機構の解明研究を後押ししている。

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Dvl2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Dvl2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Dvl2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Dvl2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。