Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400785-NIC

DVL1はDishevelled 1（Dvl-1）をコードしており、Frizzled受容体を下流のWntシグナル伝達に結び付ける中心的な細胞質スキャフォールド（足場）タンパク質である。DVL1は、制御された相互作用とリン酸化を介して、カノニカルなWnt/β-カテニン依存的転写プログラムに加え、細胞骨格ダイナミクス、極性、細胞移動を形作るノンカノニカルな平面内細胞極性（PCP）経路やWnt/Ca²⁺経路も統括する。DVL1の活性は、発生パターニング、幹細胞様の細胞挙動、組織恒常性に影響し、Wnt–Dishevelledシグナルの異常はがん生物学において増殖と浸潤の制御破綻としばしば関連する。これらの特性により、DVL1はヒト細胞における経路間クロストーク、シグナルソームの組み立て、状況依存的なWnt出力を解析するための有用な標的となる。

Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DVL1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DVL1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DVL1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DVL1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。