DTYMK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423426

Übersicht

Dtymk kodiert die Desoxythymidylat-Kinase (DTYMK), ein essenzielles zytosolisches Enzym, das dTMP zu dTDP phosphoryliert und so die für DNA-Replikation und -Reparatur erforderlichen dTTP-Pools aufrechterhält. Durch die Verknüpfung der de-novo-Thymidylat-Synthese mit dem Nukleotid-Salvage-Weg unterstützt DTYMK das Fortschreiten der S‑Phase, die Genomstabilität sowie die Erhaltung mitochondrialer und nukleärer DNA durch eine ausgewogene dNTP-Homöostase. Störungen der dTTP-Verfügbarkeit können Replikationsstress und DNA-Schadenssignalwege verstärken und verknüpfen die DTYMK-Funktion mit Signalwegen, die Zellzyklus-Checkpoints und chromosomale Integrität steuern. DTYMK wurde in Modellsystemen mit proliferativen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was Dtymk zu einem geeigneten Ansatzpunkt macht, um krankheitsrelevante Mechanismen im Zusammenhang mit dem Nukleotidstoffwechsel zu untersuchen, ohne klinische Ergebnisse zu implizieren.

Das DTYMK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Dtymk-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Dtymk-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Dtymk nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DTYMK-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Dtymk-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DTYMK-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Dtymk-Exone abzielen, die für die DTYMK-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Dtymk-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DTYMK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom DTYMK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Dtymk-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DTYMK HDR-Plasmid (m) und DTYMK HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Dtymk-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Dtymk-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.