DSCD75 Plasmide Double Nickase (h): sc-412188-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DSCD75 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DSCD75 Double Nickase Plasmid (h) e il DSCD75 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira THEM6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DSCD75 Antibody (A-8): sc-374256
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DSCD75 Plasmide Double Nickase (h) | sc-412188-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DSCD75 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-412188-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano THEM6 codifica DSCD75, una proteina transmembrana associata al reticolo endoplasmatico, implicata nei processi del metabolismo lipidico e nel mantenimento dell’omeostasi di membrana. THEM6 è stato collegato alla regolazione della gestione degli acidi grassi e della funzione del RE, inserendosi in vie che coordinano la biosintesi dei lipidi, la composizione delle membrane degli organelli e le risposte cellulari allo stress. L’alterazione di questi processi è rilevante per fenotipi che coinvolgono una segnalazione lipidica modificata e l’adattamento metabolico, spesso studiati in stati cellulari proliferativi o sottoposti a stress. Di conseguenza, DSCD75 viene comunemente analizzato nel contesto del rimodellamento della rete RE–lipidi e dei conseguenti effetti sulla fisiologia cellulare.
DSCD75 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus THEM6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di THEM6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di THEM6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con THEM6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.