DRIM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409900

Übersicht

UTP20 (auch bekannt als DRIM) kodiert einen nukleolären Faktor, der für die Ribosomenbiogenese erforderlich ist und an der Reifung der prä‑rRNA sowie am Zusammenbau der großen ribosomalen 60S‑Untereinheit beteiligt ist. Durch die Unterstützung der nukleolären Homöostase und einer effizienten Ribosomenproduktion trägt DRIM zur globalen Translationskapazität und zur Proteostase bei – Prozesse, die eng mit Zellwachstum und Stressanpassung verknüpft sind. Störungen der Ribosomenbiogenese können eine nukleoläre Stresssignalgebung und p53‑abhängige Checkpoints aktivieren und verknüpfen DRIM‑assoziierte Signalwege mit der Kontrolle der Proliferation. Eine veränderte Regulation der Ribosomenproduktion wird häufig bei Krebs und anderen Störungen des zellulären Wachstums beobachtet, wodurch DRIM einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien zur Translationsregulation und zu Stressantworten darstellt.

Das DRIM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des UTP20-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des UTP20-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von UTP20 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DRIM-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von UTP20-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DRIM-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf UTP20-Exone abzielen, die für die DRIM-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere UTP20-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DRIM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DRIM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des UTP20-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DRIM HDR-Plasmid (h) und DRIM HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von UTP20-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten UTP20-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.