Plasmide CRISPR/Cas9 KO DP (m): sc-422478

Présentation

Ptgdr code chez la souris le récepteur de la prostaglandine D2 (DP), un récepteur couplé aux protéines G qui signale principalement via Gs pour augmenter l’AMPc et activer des programmes transcriptionnels dépendants de la PKA. DP est activé par la PGD2 produite par le métabolisme de l’acide arachidonique et contribue à la régulation du tonus des muscles lisses, de la perméabilité vasculaire, de l’inflammation des muqueuses et du trafic des cellules immunitaires. Dans les leucocytes et les tissus barrières, la signalisation associée à DP s’interface avec la production de cytokines et la chimiotaxie, modulant les réponses inflammatoires de type 2 et la communication neuro-immune. Une activité PGD2–DP dérégulée a été impliquée, dans des modèles expérimentaux, dans une inflammation des voies aériennes de type asthmatique, des maladies allergiques et des voies de la douleur inflammatoire, faisant de Ptgdr un point d’entrée utile pour disséquer la signalisation des médiateurs lipidiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ptgdr dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ptgdr, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ptgdr à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ptgdr pour l'étude de la signalisation de DP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ptgdr essentiels à la fonction de DP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ptgdr pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le DP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ptgdr. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DP plasmide HDR (m) et le DP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ptgdr pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ptgdr définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.