DnaJB6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404227

Übersicht

DNAJB6 kodiert DnaJB6, ein Mitglied der Hsp40/DnaJ-Co-Chaperon-Familie, das mit Hsp70 zusammenwirkt, um die Proteinfaltung, die funktionelle Einordnung/Sortierung („Triage“) und die Proteostase unter basalen Bedingungen wie auch unter Stress zu regulieren. DnaJB6 ist daran beteiligt, die Aggregation fehlgefalteter Proteine zu unterdrücken, und trägt zur Organisation des Zytoskeletts, zur chaperon-gestützten Qualitätskontrolle sowie zu stressresponsiven Signalwegen bei, die die zelluläre Homöostase beeinflussen. Störungen der DNAJB6-Funktion wurden mit Erkrankungen in Verbindung gebracht, die durch Proteinaggregation und Muskelpathologie gekennzeichnet sind, darunter die Gliedergürtel-Muskeldystrophie; zudem wird DNAJB6 im Kontext proteotoxischen Stresses untersucht, der für Neurodegeneration relevant ist. Diese biologischen Zusammenhänge machen DNAJB6 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um Signal- und Regulationswege zu analysieren, die Aggregation, Chaperon-Netzwerke und die zelluläre Widerstandsfähigkeit gegenüber fehlgefalteten Proteinen steuern.

Das DnaJB6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DNAJB6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DNAJB6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DNAJB6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DnaJB6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DNAJB6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DnaJB6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DNAJB6-Exone abzielen, die für die DnaJB6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DNAJB6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DnaJB6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DnaJB6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DNAJB6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DnaJB6 HDR-Plasmid (h) und DnaJB6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DNAJB6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DNAJB6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.