Plásmido CRISPR de Activación (h) Dkk-1: sc-400540-ACT

El DKK1 humano codifica la proteína 1 relacionada con Dickkopf (Dkk-1), un antagonista secretado de la señalización canónica Wnt/β-catenina que se une a los correceptores LRP5/6 y modula el ensamblaje del complejo receptor. Al restringir los programas transcripcionales impulsados por Wnt, Dkk-1 influye en las decisiones de destino celular, la proliferación y la diferenciación, con funciones destacadas en el patrón embrionario y la remodelación ósea. La expresión desregulada de DKK1 se asocia con la actividad aberrante de la vía Wnt observada en oncología, en contextos inflamatorios y en la biología de enfermedades musculoesqueléticas, donde puede remodelar las interacciones estroma–tumor y los procesos osteolíticos. Como regulador a nivel de vía, DKK1 se investiga con frecuencia para cartografiar la retroalimentación de la red Wnt, los gradientes de señalización extracelular y las salidas transcripcionales dependientes de β-catenina.

Dkk-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DKK1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Dkk-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DKK1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DKK1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Dkk-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DKK1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Dkk-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Dkk-1 en células tumorales con expresión de DKK1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.