Dist1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406805

Übersicht

RHBDF1 (Dist1) kodiert ein inaktives Mitglied der Rhomboid-Familie, das als regulatorischer Kofaktor für die im ER angesiedelte Qualitätskontrolle und die Wachstumsfaktor-Signalübertragung fungiert. Dist1 ist an der Kontrolle des ADAM17-abhängigen Ectodomain-Sheddings beteiligt und beeinflusst dadurch die Freisetzung von EGFR-Liganden sowie die nachgeschaltete Aktivität der MAPK/ERK- und PI3K/AKT-Signalwege, außerdem zelluläre Stressantworten und inflammatorische Signalgebung. Über diese Prozesse trägt RHBDF1 zur epithelialen Homöostase sowie zu Programmen des Zellüberlebens und der Migration bei. Eine fehlregulierte Expression oder Aktivität von RHBDF1 wurde mit veränderter proliferativer Signalübertragung und krankheitsrelevanten Phänotypen in Krebs- und Entzündungskontexten in Verbindung gebracht, was seine Eignung als mechanistisches Ziel in Signalwegstudien unterstreicht.

Das Dist1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RHBDF1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RHBDF1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RHBDF1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Dist1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RHBDF1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Dist1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RHBDF1-Exone abzielen, die für die Dist1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RHBDF1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Dist1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Dist1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RHBDF1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Dist1 HDR-Plasmid (h) und Dist1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RHBDF1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RHBDF1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.