Plásmido CRISPR de Activación (h) DIO3: sc-403729-ACT

DIO3 codifica la desyodasa de yodotironinas tipo III (DIO3), una selenoenzima de membrana integral que inactiva las hormonas tiroideas al convertir T4 en T3 inversa y T3 en T2, limitando así la señalización local de hormonas tiroideas. Al modelar la disponibilidad hormonal específica de cada tejido, DIO3 influye en programas transcripcionales regulados por los receptores de hormonas tiroideas y contribuye a la temporización del desarrollo, la homeostasis metabólica y la diferenciación celular. La expresión de DIO3 se regula en contextos como la impronta genómica y la señalización asociada a hipoxia, y su desregulación se ha vinculado con cambios en los puntos de ajuste endocrinos y en el control del crecimiento. En cáncer y trastornos del desarrollo, la actividad aberrante de DIO3 se estudia con frecuencia como un mecanismo para modificar redes de expresión génica dependientes de hormonas tiroideas dentro del microambiente tumoral o durante la organogénesis.

DIO3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DIO3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DIO3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DIO3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DIO3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DIO3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DIO3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DIO3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DIO3 en células tumorales con expresión de DIO3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.