DIO2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402262

Descripción general

DIO2 codifica la desyodasa de yodotironinas tipo II, una selenoenzima asociada al retículo endoplásmico que cataliza la desyodación del anillo externo de la tiroxina (T4) para generar la hormona activa triyodotironina (T3). Al controlar la disponibilidad intracelular de T3, DIO2 configura programas transcripcionales dependientes del receptor de hormona tiroidea que regulan el metabolismo energético, la termogénesis, la homeostasis de lípidos y glucosa, y la diferenciación en distintos contextos tisulares. La actividad de DIO2 se integra con la biología redox y del selenio, incluida la síntesis de selenoproteínas y las respuestas al estrés oxidativo que influyen en la estabilidad y el recambio de la enzima. La alteración de la expresión o la función de DIO2 se ha vinculado a fenotipos metabólicos y a fisiopatología sensible a la hormona tiroidea, lo que respalda su estudio en la regulación endocrina, los mecanismos relacionados con la obesidad y la señalización de hormona tiroidea específica de tejido.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DIO2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DIO2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DIO2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DIO2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DIO2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DIO2 para la investigación de la señalización de DIO2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DIO2 críticos para la función de DIO2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DIO2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DIO2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DIO2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DIO2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DIO2 (h) y el plásmido HDR DIO2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DIO2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DIO2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.