Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO DIO1 (m): sc-420002
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- DIO1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique DIO1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DIO1 Antibody (B-7): sc-515198
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO DIO1 (m) | sc-420002 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin *Dio1* code l’iodothyronine désiodase 1 (DIO1), une sélénoenzyme qui catalyse la désiodation des hormones thyroïdiennes sur l’anneau externe et l’anneau interne, contribuant à la conversion périphérique de la thyroxine (T4) en triiodothyronine (T3) bioactive ainsi qu’à l’élimination des hormones. L’activité de DIO1 soutient l’homéostasie endocrine et métabolique en modulant la disponibilité intracellulaire et circulante des hormones thyroïdiennes, influençant ainsi les programmes transcriptionnels contrôlés par les récepteurs des hormones thyroïdiennes. *Dio1* est particulièrement étudié dans le contexte du métabolisme hépatique et rénal des hormones thyroïdiennes, de la biologie du sélénium et du fonctionnement enzymatique dépendant de l’état rédox. Une expression ou une activité altérée des désiodases a été associée à une dérégulation de la signalisation des hormones thyroïdiennes dans des contextes métaboliques et inflammatoires, ce qui motive des études mécanistiques des voies dépendantes de *Dio1* dans des modèles murins.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DIO1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Dio1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Dio1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Dio1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DIO1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Dio1 pour l'étude de la signalisation de DIO1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Dio1 essentiels à la fonction de DIO1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Dio1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le DIO1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le DIO1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Dio1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le DIO1 plasmide HDR (m) et le DIO1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Dio1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Dio1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.