DHODH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402983

Übersicht

Die humane DHODH (Dihydroorotat-Dehydrogenase) ist ein Flavoprotein der inneren Mitochondrienmembran, das die geschwindigkeitsbestimmende Oxidation von Dihydroorotat zu Orotat in der de-novo-Pyrimidinbiosynthese katalysiert und dabei die Nukleotidproduktion über Ubichinon an die Atmungskette koppelt. Durch die Kontrolle der UMP-Verfügbarkeit unterstützt DHODH die DNA-/RNA-Synthese, das Fortschreiten des Zellzyklus und die metabolische Anpassung unter proliferativem Stress. Eine Störung der DHODH-Aktivität verändert Nukleotidpools, Replikationsdynamik und das mitochondriale Redoxgleichgewicht und verknüpft DHODH damit mit Signalwegen, die die Genomstabilität und die zelluläre Bioenergetik steuern. Eine dysregulierte Pyrimidinmetabolisierung und eine Abhängigkeit von DHODH wurden in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten beobachtet, darunter die Proliferation von Krebszellen und die Aktivierung von Immunzellen.

Das DHODH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DHODH-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DHODH-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DHODH nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DHODH-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DHODH-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DHODH-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DHODH-Exone abzielen, die für die DHODH-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DHODH-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DHODH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DHODH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DHODH-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DHODH HDR-Plasmid (h) und DHODH HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DHODH-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DHODH-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.