DGAT2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416229-ACT

ヒトDGAT2（ジアシルグリセロールO-アシルトランスフェラーゼ2）は小胞体に局在する酵素で、脂肪酸アシルCoAを用いてジアシルグリセロールをアシル化し、トリアシルグリセロール生合成の最終かつ不可逆的（コミット）な段階を触媒します。中性脂質の産生と脂肪滴の新生を制御することで、DGAT2は脂肪酸取り込みおよびde novo脂質合成を、細胞のエネルギー貯蔵と膜脂質恒常性に結び付けます。DGAT2活性は、栄養過多時におけるSREBPシグナルにより統御される脂質代謝プログラム、β酸化のバランス、小胞体ストレス応答と交差します。DGAT2発現の破綻とトリグリセリド蓄積は、脂肪肝やインスリン抵抗性などの代謝機能障害に加え、一部のがんでみられる脂質依存的なリモデリングにおいても、しばしば研究対象となっています。

DGAT2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DGAT2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DGAT2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DGAT2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDGAT2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DGAT2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDGAT2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDGAT2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDGAT2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDGAT2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。