Plasmide Double Nickase (m) Derlin-1: sc-426756-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Derlin-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Derlin-1 Double Nickase (m) et le plasmide Derlin-1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Derl1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ? Antibody (?):
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Derlin-1 | sc-426756-NIC | 20 µg | $410.00 |
Derl1 code la derline‑1, un composant membranaire du réticulum endoplasmique (RE) de la machinerie de dégradation associée au RE (ERAD), qui contribue à reconnaître et à rétrotransloquer les protéines mal conformées luminales et membranaires vers leur élimination par le système ubiquitine–protéasome. La derline‑1 agit au sein de réseaux de protéostasie liés à la réponse aux protéines mal repliées (UPR), en se coordonnant avec des facteurs d’ubiquitination et des complexes d’extraction dépendants d’ATPase afin de maintenir l’homéostasie du RE. Une perturbation du contrôle qualité dépendant de DERL1 peut accroître la signalisation de stress du RE et modifier la fonction de la voie sécrétoire, reliant cette voie aux décisions de survie cellulaire en situation de stress protéotoxique. Dans les modèles murins, Derl1 est souvent étudié dans des contextes où le remodelage de l’ERAD et de l’UPR influence la fonction immunitaire, l’homéostasie métabolique et des phénotypes de protéostasie pertinents pour la neurobiologie.
Derlin-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Derl1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Derl1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Derl1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Derl1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.