DDT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-418461

概要

DDT（D-dopachrome tautomerase、別名MIF-2）は、MIF軸と協調して働き、免疫シグナル伝達や細胞ストレス応答に関与するサイトカイン様酵素です。細胞種や利用する受容体などの状況に応じて、MAPK/ERKおよびNF-κBネットワークと交差する経路を介し、炎症性メディエーター産生の調節、白血球の動員、ならびに細胞生存を促進するシグナル伝達に寄与します。DDTの発現は自然免疫・獲得免疫の活性調節と関連づけられており、腫瘍関連炎症、自己免疫表現型、代謝異常との関連も報告されています。酵素活性をもつ可溶性因子として、DDTは、ヒト細胞においてサイトカインシグナルが酸化還元制御、増殖、遊走プログラムとどのように統合されるかを解明するうえで、解析しやすい標的（ノード）となります。

DDT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDDT遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DDT内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DDTのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DDTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DDTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DDT欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DDTの機能に不可欠なDDTエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DDTゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DDT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDDT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DDT遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DDT HDRプラスミド（h）および DDT HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDDTホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDDT標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。