DDT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418461

Übersicht

DDT (D‑Dopachrom‑Tautomerase), auch bekannt als MIF‑2, ist ein zytokinähnliches Enzym, das an der Immun-Signalübertragung und an zellulären Stressantworten beteiligt ist und dabei im Zusammenspiel mit der MIF‑Achse wirkt. Es trägt – abhängig von Zellkontext und Rezeptornutzung – zur Regulation der Produktion entzündlicher Mediatoren, zur Rekrutierung von Leukozyten sowie zu pro-survival‑Signalwegen bei, die Schnittmengen mit MAPK/ERK- und NF‑κB‑Netzwerken aufweisen. Die Expression von DDT wird mit der Modulation angeborener und adaptiver Immunaktivität in Verbindung gebracht; beschrieben ist eine Relevanz u. a. für tumorassoziierte Entzündung, Autoimmunphänotypen und metabolische Dysregulation. Als löslicher Faktor mit enzymatischer Aktivität stellt DDT einen gut untersuchbaren Ansatzpunkt dar, um zu analysieren, wie Zytokinsignale in menschlichen Zellen mit Redox‑, Proliferations- und Migrationsprogrammen verknüpft sind.

Das DDT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DDT-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DDT-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DDT nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DDT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DDT-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DDT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DDT-Exone abzielen, die für die DDT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DDT-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DDT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DDT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DDT-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DDT HDR-Plasmid (h) und DDT HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DDT-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DDT-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.