DDI2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-427193

Descripción general

DDI2 de ratón (homólogo 2 de DNA damage-inducible 1) codifica una proteasa aspártica implicada en el control de calidad de las proteínas y en la señalización de respuesta al estrés, con funciones descritas en el procesamiento y la regulación de programas transcripcionales vinculados a la función del proteasoma. La actividad de DDI2 se relaciona con la dinámica del sistema ubiquitina–proteasoma y con la adaptación celular al estrés proteotóxico, influyendo en el recambio de proteínas mal plegadas o dañadas. A través de estos procesos, DDI2 puede afectar vías que regulan la progresión del ciclo celular, la apoptosis y la estabilidad del genoma en condiciones de estrés. La desregulación de la proteostasis y de la señalización de estrés es relevante para mecanismos estudiados en neurodegeneración, inflamación y biología del cáncer, lo que convierte a Ddi2 en un locus útil para el análisis de vías en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DDI2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ddi2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ddi2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ddi2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DDI2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ddi2 para la investigación de la señalización de DDI2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ddi2 críticos para la función de DDI2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ddi2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DDI2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido DDI2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ddi2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DDI2 (m) y el plásmido HDR DDI2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ddi2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ddi2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.