Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cytokeratin 19 (h): sc-400281

Présentation

KRT19 code la cytokératine 19 (CK19), une protéine de filament intermédiaire de type I qui s’associe à des kératines de type II pour former le cytosquelette de kératines dans les cellules épithéliales. CK19 contribue à l’intégrité structurelle et à la mécanotransduction, participant à la polarité cellulaire, à la dynamique d’adhérence et aux réponses au stress via des interactions avec les complexes desmosomaux et hémidesmosomaux. Une expression altérée de KRT19 est associée aux états de différenciation épithéliale et aux programmes de remodelage tels que la réparation des plaies et la transition épithélio-mésenchymateuse, la reliant à des changements de prolifération, de migration et de plasticité cellulaire. En biologie du cancer, CK19 est largement utilisée comme marqueur de lignée épithéliale et fait fréquemment l’objet d’études portant sur la progression tumorale et les phénotypes associés aux métastases.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cytokeratin 19 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KRT19 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KRT19, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KRT19 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cytokeratin 19.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KRT19 pour l'étude de la signalisation de Cytokeratin 19, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KRT19 essentiels à la fonction de Cytokeratin 19
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KRT19 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Cytokeratin 19 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Cytokeratin 19 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KRT19. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Cytokeratin 19 plasmide HDR (h) et le Cytokeratin 19 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KRT19 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KRT19 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.