Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cytokeratin 18 (h): sc-400305

Présentation

KRT18 code la cytokératine 18, une protéine de filament intermédiaire de type I qui s’hétéropolymérise avec la kératine 8 pour former le réseau cytosquelettique central des cellules épithéliales simples. Ce système filamentaire soutient l’architecture cellulaire et la résistance mécanique, et interagit avec les complexes jonctionnels, le positionnement des organites et la signalisation de réponse au stress, qui coordonne la progression du cycle cellulaire et l’apoptose. La dynamique de la cytokératine 18 est régulée par la phosphorylation et le clivage protéolytique, ce qui l’associe au remodelage du cytosquelette pendant la mitose et en situation de stress cellulaire. Une expression dérégulée de KRT18 ou une organisation anormale des filaments est fréquemment utilisée comme marqueur de l’état épithélial et a été étudiée dans des contextes de lésion épithéliale, d’inflammation et de biologie des cellules tumorales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cytokeratin 18 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KRT18 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KRT18, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KRT18 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cytokeratin 18.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KRT18 pour l'étude de la signalisation de Cytokeratin 18, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KRT18 essentiels à la fonction de Cytokeratin 18
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KRT18 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Cytokeratin 18 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Cytokeratin 18 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KRT18. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Cytokeratin 18 plasmide HDR (h) et le Cytokeratin 18 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KRT18 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KRT18 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.