Cytokeratin 16CRISPR激活质粒(h): sc-403138-ACT

KRT16 编码细胞角蛋白16（cytokeratin 16），属于 I 型中间丝蛋白，可与角蛋白6家族成员形成异源二聚体，从而增强复层上皮中的细胞骨架网络。其在创伤修复、机械应激和炎症信号作用下会被快速诱导表达，促进角质形成细胞的增殖、迁移以及屏障重塑。细胞角蛋白16参与角蛋白丝的组织与上皮分化程序，并与应激反应通路及细胞骨架动态相互衔接。KRT16 表达失调与皮肤高增殖状态及角化异常疾病相关，因此可作为研究表皮稳态与上皮应激反应的有用标志物和关键功能节点。

Cytokeratin 16 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性KRT16的表达。

Cytokeratin 16 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的KRT16基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于KRT16转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Cytokeratin 16表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的KRT16位点，并能够研究内源性位点上依赖于Cytokeratin 16的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在KRT16表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Cytokeratin 16通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。