Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 15: sc-401869-NIC

KRT15 code la cytokératine 15, une protéine de filament intermédiaire de type I enrichie dans les kératinocytes basaux et les compartiments de progéniteurs épithéliaux, où elle contribue à l’intégrité du cytosquelette et à la résistance des tissus. La cytokératine 15 participe à l’assemblage des filaments intermédiaires et interagit avec les complexes d’adhérence desmosomaux et hémidesmosomaux, influençant les programmes d’adhérence cellule–cellule, de polarité et de migration. Dans la peau et les épithéliums stratifiés, l’expression de KRT15 est couramment utilisée pour étudier la dynamique des cellules souches, la différenciation épidermique et les processus de réparation des plaies. Des réseaux de kératines dérégulés, notamment des profils d’expression de KRT15 altérés, sont associés aux réponses épithéliales au stress et ont été étudiés dans des contextes d’hyperprolifération, d’inflammation et de biologie tumorale.

Cytokeratin 15 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KRT15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KRT15. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KRT15. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KRT15.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.