Plasmide CRISPR d'Activation (h) Cytokeratin 1: sc-400893-ACT

KRT1 code la cytokératine 1, une protéine de filament intermédiaire de type II qui forme un hétérodimère avec la kératine 10 pour constituer le réseau de kératines suprabasales dans les épithéliums stratifiés. Ce système de filaments confère une résistance mécanique, soutient l’adhérence cellule–cellule associée aux desmosomes et participe aux programmes de différenciation des kératinocytes et de formation de la barrière. La dynamique de la cytokératine 1 s’articule avec le remodelage du cytosquelette et la signalisation de réponse au stress, qui influencent l’intégrité épithéliale lors de la réparation des plaies et de l’inflammation. Une expression dérégulée de KRT1 ou une organisation anormale des filaments de kératine est associée à des phénotypes de fragilité épidermique et fait souvent l’objet d’études sur l’hyperkératose, les défauts de kératinisation et l’adaptation de l’épithélium au stress.

Cytokeratin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KRT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Cytokeratin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KRT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KRT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Cytokeratin 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KRT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Cytokeratin 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Cytokeratin 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de KRT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.