CYTIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432749

Übersicht

Cytip (cytohesin-1-interagierendes Protein) kodiert CYTIP, ein Adapterprotein, das die Cytohesin/ARF‑GTPase-Signalübertragung reguliert und dazu beiträgt, integrinabhängige Adhäsion und Umbauprozesse des Zytoskeletts zu koordinieren. In Immunzellen trägt CYTIP zur Inside-out-Signalübertragung bei, die LFA‑1/ICAM-Interaktionen feinabstimmt, und beeinflusst damit die Motilität von Leukozyten, die Stabilität der immunologischen Synapse sowie die Dynamik von Zell‑Zell-Kontakten. Über diese Funktionen ist Cytip mit Signalwegen verknüpft, die Lymphozytenaktivierung, Migration und Gewebeinfiltration steuern, und ist damit relevant für mechanistische Studien zur Immunregulation und zu inflammationsassoziierten Phänotypen. Eine Störung von Cytip in der Maus ist daher nützlich, um zu untersuchen, wie Adhäsionssignalgebung in vivo und in kultivierten Immunmodellen mit nachgeschalteten Polarisations- und Trafficking-Programmen zusammenspielt.

Das CYTIP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cytip-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cytip-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cytip nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CYTIP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cytip-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CYTIP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cytip-Exone abzielen, die für die CYTIP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cytip-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CYTIP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CYTIP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cytip-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CYTIP HDR-Plasmid (m) und CYTIP HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cytip-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cytip-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.