Plasmide CRISPR/Cas9 KO CYTIP (h): sc-411299

Présentation

CYTIP (cytohesin-1 interacting protein) est un adaptateur cytoplasmique abondant dans les cellules immunitaires, qui module la signalisation « inside-out » vers les intégrines et favorise l’adhésion, la polarisation et la migration des leucocytes. En se liant à la cytohésine-1, CYTIP peut influencer le trafic membranaire dépendant des GTPases ARF et le remodelage du cytosquelette d’actine, reliant la signalisation déclenchée par les récepteurs à des modifications de la motilité cellulaire et de l’organisation de la synapse immunologique. CYTIP est impliquée dans des voies qui régissent l’activation des lymphocytes T et la fonction des cellules dendritiques, où une expression altérée peut modifier le recrutement des cellules immunitaires et les réponses effectrices. La dérégulation de la signalisation associée à CYTIP a été étudiée dans le contexte des processus inflammatoires et des interactions tumeur–système immunitaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’immunologie mécanistique et la recherche sur le microenvironnement tumoral.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CYTIP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CYTIP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CYTIP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CYTIP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CYTIP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CYTIP pour l'étude de la signalisation de CYTIP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CYTIP essentiels à la fonction de CYTIP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CYTIP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CYTIP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CYTIP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CYTIP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CYTIP plasmide HDR (h) et le CYTIP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CYTIP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CYTIP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.