Plasmide CRISPR/Cas9 KO cystatin SA (h): sc-406907

Présentation

CST2 code la cystatine SA, un inhibiteur sécrété des protéases à cystéine qui limite l’activité des cathepsines de type papaïne et les activités protéolytiques apparentées au niveau des surfaces muqueuses. En modulant l’équilibre protéases–antiprotéases, la cystatine SA contribue à réguler le remodelage de la matrice extracellulaire, le processing des peptides et la signalisation inflammatoire dans le microenvironnement oral et des voies aérodigestives supérieures. Une expression altérée des cystatines salivaires a été associée à des modifications de la défense innée, des interactions avec le microbiome et du remodelage tissulaire lié à la protéolyse observés dans diverses affections inflammatoires et des phénotypes adjacents au cancer. CST2 est donc pertinent pour l’étude des voies dépendantes des protéases qui influencent la fonction de barrière épithéliale et la composition du sécrétome.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO cystatin SA (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CST2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CST2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CST2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine cystatin SA.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CST2 pour l'étude de la signalisation de cystatin SA, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CST2 essentiels à la fonction de cystatin SA
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CST2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le cystatin SA plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le cystatin SA plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CST2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le cystatin SA plasmide HDR (h) et le cystatin SA (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CST2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CST2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.