cystatin D CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405049-ACT

CST5 はシスタチンDをコードしており、シスタチンDは分泌型のタイプ2シスタチンとして、カテプシンなどのパパイン様システインプロテアーゼを阻害し、細胞外および細胞内のタンパク質分解（プロテオリシス）の調節に寄与します。プロテアーゼ活性を調整することで、シスタチンDは上皮の恒常性、細胞外マトリックス（ECM）のリモデリング、抗原プロセシング、そして細胞分化やバリア機能に影響し得る炎症性シグナル伝達に関与します。CST5 発現の変化やカテプシン–シスタチンの不均衡は、腫瘍生物学、粘膜炎症、組織リモデリングといった文脈で報告されており、プロテオスタシスおよび微小環境の制御を研究するうえで重要です。複数の上皮コンパートメントで発現するヒトタンパク質として、シスタチンDは、浸潤に関連するプロテオリシスやストレス応答性の転写プログラムを制御する経路の研究で頻繁に解析対象となります。

cystatin D CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CST5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

cystatin D CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CST5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCST5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性cystatin Dの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCST5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcystatin D依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCST5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcystatin D経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。