cystatin C Double Nickaseプラスミド (h): sc-402420-NIC

CST3はシスタチンCをコードしており、シスタチンCは分泌型の2型シスタチンとして、カテプシンなどのリソソーム性および細胞外のシステインプロテアーゼを強力に阻害し、組織リモデリング、抗原処理、炎症性微小環境における過剰なタンパク質分解を抑制します。カテプシン活性のバランスを取ることで、シスタチンCは細胞外マトリックスの代謝回転、細胞移動、ならびに免疫シグナル伝達や細胞恒常性に関連するエンド・リソソーム系プロテアーゼネットワークの制御に寄与します。CST3発現やシスタチンC量の変化は、神経変性過程、アミロイド関連病理、血管および腎臓の生物学と関連づけられており、プロテオスタシスやバリア機能の研究における汎用的な分子指標として広く用いられています。これらの特徴により、CST3は中枢神経系（CNS）と末梢系にまたがるプロテアーゼ—アンチプロテアーゼ平衡を検討するための有用な結節点となります。

cystatin C ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CST3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CST3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CST3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CST3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。