CYP8B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403383

概要

CYP8B1は、小胞体に局在するシトクロムP450酵素をコードし、胆汁酸中間体の12α-水酸化を触媒する。この反応はコール酸産生およびコール酸／ケノデオキシコール酸比を規定する主要な決定因子である。胆汁酸組成を制御することで、CYP8B1はFXRおよびTGR5を介した腸肝循環シグナリングに影響し、肝臓の脂質・糖代謝ならびにより広範なステロール恒常性を形作る。CYP8B1活性の変化は、代謝性肝疾患、胆汁うっ滞状態、コレステロール処理に影響する病態で見られる胆汁酸プールの異常な制御不全と関連している。このためCYP8B1は、胆汁酸駆動性の転写プログラムや、肝細胞と腸管シグナル間のクロストークを解明するうえで有用な結節点となる。

CYP8B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCYP8B1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CYP8B1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CYP8B1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CYP8B1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CYP8B1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CYP8B1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CYP8B1の機能に不可欠なCYP8B1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CYP8B1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CYP8B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCYP8B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CYP8B1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CYP8B1 HDRプラスミド（h）および CYP8B1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCYP8B1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCYP8B1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。