CYP8B1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403383

Descripción general

CYP8B1 codifica una enzima del citocromo P450 localizada en el retículo endoplásmico que cataliza la 12α-hidroxilación de intermediarios de ácidos biliares, un determinante clave de la producción de ácido cólico y de la proporción ácido cólico/ácido quenodesoxicólico. Al controlar la composición de los ácidos biliares, CYP8B1 influye en la señalización enterohepática a través de FXR y TGR5, modulando el metabolismo hepático de lípidos y glucosa y una homeostasis más amplia de los esteroles. La actividad alterada de CYP8B1 se asocia con reservas de ácidos biliares desreguladas observadas en la enfermedad hepática metabólica, estados colestásicos y afecciones que afectan el manejo del colesterol. Esto convierte a CYP8B1 en un nodo útil para desentrañar programas transcripcionales impulsados por ácidos biliares y la comunicación cruzada entre hepatocitos y la señalización intestinal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CYP8B1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CYP8B1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CYP8B1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CYP8B1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CYP8B1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CYP8B1 para la investigación de la señalización de CYP8B1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CYP8B1 críticos para la función de CYP8B1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CYP8B1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CYP8B1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CYP8B1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CYP8B1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CYP8B1 (h) y el plásmido HDR CYP8B1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CYP8B1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CYP8B1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.