Plásmido CRISPR de Activación (h) CYP2E1: sc-401357-ACT

El CYP2E1 humano codifica una monooxigenasa del citocromo P450 que cataliza la oxidación de sustratos pequeños y de bajo peso molecular, entre ellos etanol, acetona y diversos xenobióticos, configurando la capacidad metabólica hepática. Mediante la transferencia de electrones dependiente de NADPH y su acoplamiento a la homeostasis redox, la actividad de CYP2E1 puede aumentar las especies reactivas de oxígeno y la peroxidación lipídica, lo que lo vincula a respuestas de estrés celular y a la señalización inflamatoria. CYP2E1 está implicado en las vías de metabolismo de fármacos y carcinogénesis química, y se estudia con frecuencia en el contexto de lesión hepática, esteatohepatitis y hepatotoxicidad mediada por toxinas. La variación en la expresión de CYP2E1 también influye en las diferencias interindividuales en la depuración de xenobióticos y en la formación de metabolitos relevantes para la farmacología y la biología de la exposición ambiental.

CYP2E1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CYP2E1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CYP2E1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CYP2E1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CYP2E1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CYP2E1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CYP2E1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CYP2E1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CYP2E1 en células tumorales con expresión de CYP2E1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.