Plasmide CRISPR/Cas9 KO CYFIP2 (m): sc-429445

Présentation

Cyfip2 code pour CYFIP2, un effecteur cytoplasmique qui couple la signalisation de Rac1 au remodelage du cytosquelette d’actine et au contrôle de la traduction, via des interactions avec le complexe régulateur WAVE et des assemblages ribonucléoprotéiques associés à la FMRP. Dans les neurones, CYFIP2 contribue à la dynamique du cône de croissance, à la maturation des épines dendritiques et à la plasticité synaptique en coordonnant la polymérisation de l’actine dépendante d’Arp2/3 avec la synthèse protéique dépendante de l’activité. Ces processus placent CYFIP2 à l’interface entre l’organisation du cytosquelette et le métabolisme des ARN, la reliant à des voies impliquées dans la connectivité neuronale et le fonctionnement des synapses excitatrices. Une activité altérée de CYFIP2 a été associée, dans des études génétiques et fonctionnelles, à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une susceptibilité accrue aux crises, ce qui étaye sa pertinence pour la modélisation mécanistique dans des systèmes murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CYFIP2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cyfip2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cyfip2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cyfip2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CYFIP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cyfip2 pour l'étude de la signalisation de CYFIP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cyfip2 essentiels à la fonction de CYFIP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cyfip2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CYFIP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CYFIP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cyfip2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CYFIP2 plasmide HDR (m) et le CYFIP2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cyfip2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cyfip2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.