Plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin Y (m): sc-426856

Présentation

Le gène murin **Ccny** code la cycline Y, une cycline associée à la membrane qui coordonne la signalisation liée au cycle cellulaire avec des programmes de développement et métaboliques. La cycline Y a été impliquée dans la régulation de l’activité des CDK et dans la modulation de la voie Wnt/β-caténine via le contrôle de composants de signalisation à la membrane plasmique, influençant la prolifération, la différenciation et l’homéostasie tissulaire. L’expression de **Ccny** et la dynamique des signalisations pilotées par les cyclines sont étudiées dans des contextes tels que le comportement des cellules souches/progénitrices, le développement neuronal et le remodelage tissulaire, où un contrôle du cycle cellulaire dérégulé et une signalisation Wnt altérée constituent des caractéristiques fréquentes. En conséquence, les modèles de perte de fonction de **Ccny** sont utiles pour disséquer la régulation des points de contrôle dépendants des cyclines, les interactions entre voies (crosstalk) et des phénotypes pertinents pour la biologie du cancer et la recherche en neurodéveloppement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin Y (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ccny dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ccny, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ccny à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine cyclin Y.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ccny pour l'étude de la signalisation de cyclin Y, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ccny essentiels à la fonction de cyclin Y
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ccny pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le cyclin Y plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le cyclin Y plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ccny. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le cyclin Y plasmide HDR (m) et le cyclin Y (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ccny pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ccny définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.